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"DETERMINACION EN SANGRE
Y LAVADO BRONCOALVEOLAR
DE LINFOCITOS TCD4 Y TCD8 EN PACIENTES CON
TUBERCULOSIS PULMONAR ACTIVA"
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| SUMMARY Tuberculosis
is a disease caused by the Koch bacillus which appears in
a subjet unable to develop en adequate cellular response.
This response is characterised by local T CD4 lymphocytes
increase to inhibit bacillus division. Dres Víctor Acevedo y Oscar
Venegas R. RESUMEN La Tuberculosis es una enfermedad causada por el Bacilo de Koch, el que para producirla, requiere que el paciente, por diversas razones, sea incapaz de desarrollar una respuesta inmune celular adecuada. Esta respuesta inmune se caracteriza por un aumento a nivel local de linfocitos TCD4 a fin de controlar la multiplicación bacilar. Los linfocitos TCD4 están disminuidos en el curso de la enfermedad y su normalidad es restablecida por el tratamiento antituberculoso. Este trabajo tiene por objeto determinar las características del cambio e al subpoblaciones de linfocitos TCD4 y TCD8 en 3 pacientes con TBC pulmonar activa, bacteriológicamente demostrada. Con este fin se midió, en sangre y Lavado Broncoalveolar, las subpoblaciones linfocitarias antes, a los 3 meses y 1 mes después de terminado el tratamiento. En todos los casos estudiados se constato a partir del tercer mes, la normalización de los linfocitos TCD4 y de la relación LTCD4/LTCD8 a nivel local. INTRODUCCION Aún cuando en Chile desde el año 1971 el valor promedio de los indicadores de daño por Tuberculosis (TBC) ha experimentado una mejoría importante, se puede afirmar que en nuestro país esta enfermedad constituye todavía un problema de salud pública (1). Desde el punto de vista clínico el control de la enfermedad depende de la acción efectiva de la inmunidad mediada por células, en la cual juega un rol fundamental el Macrófago Alveolar que fagocita y procesa los antígenos bacilares para presentarlos a los linfocitos T., en concomitancia con una señal, genéticamente determinada, que se expresa mediante el HLA/DR (2). Como consecuencia de la estimulación antigénica y del HLA/DR, los linfocitos TCD4 y TCD8 producen citoquinas como la Interleuquina 2 (IL 2) y el gama Interferón (gIFN), que activan al Macrófago Alveolar para que facocite y neutralice el crecimiento del Mycobacterio (3,4), así como también para que libere Factor de Necrosis tumoral (TNF) y otras moléculas activas, altamente tóxicas, como proteasas y radicales libres del oxígeno, con el objeto de matar al Bacilo de Koch (5,6). Por otra parte, la T.B.C. produce alteraciones inmunológicas, celulares y humorales que son consecuencia de la enfermedad y que revierten con su tratamiento (7), las que tendrían su origen en la activación de la capacidad productora de Monocitos supresores de la inmunidad (8,9) y, probablemente también, al hecho que la enfermedad induce una inversión en la relación TCD4/TCD8 (10). Recientemente se ha demostrado, en pacientes con TBC pulmonar activa (11), una disminución de la relación TCD4/TCD8 con un aumento de los linfocitos TCD8, que se asoció con una menor velocidad de regresión de las lesiones radiológicas de estos enfermos, todo lo cual sugeriría que un adecuado balance entre las subpoblaciones de linfocitos T juega un papel crucial en la modulación de la respuesta defensiva contra la infección por el Bacilo de la Tuberculosis. OBJETIVO El objetivo de este trabajo es identificar las diferentes supoblaciones de linfocitos TCD4 y TCD8 en pacientes con Tuberculosis pulmonar activa sometidos a tratamiento antituberculoso, con el fin de determinar en ellos, la eventual existencia de cambios en el comportamiento de la inmunidad celular. MATERIAL Y METODO Pacientes: En 3 pacientes adultos (2 mujeres y 1 hombre) de entre 26 y 68 años de edad, portadores de Tuberculosis pulmonar activa, bacteriológicamente demostrada (BKD+C+) sin compromiso nutricional medido según el índice peso/talla y con proteinemia normal; sin antecedentes de tabaquismo ni de patología concomitante, con V.I.H. negativo y que no estaban usando drogas inmunodepresoras, se midió en sangre y lavado broncoalveolar, las subpoblaciones de linfocitos TCD4 y TCD8 antes, a los 3 meses y 1 mes después del alta de tratamiento antituberculoso. El lavado broncoalveolar fue efectuado con Fibrobroncoscopio Olympus BF Type 1T20D, previa anestesia local con Dimecaína al 4%, bloqueo vagal con 1 milígramo de Atropina intramuscular 1 hora antes del procedimiento y ayuno previo de 12 horas. La muestra se tomó con solución salina al 9/00 administrada en 5 alícuotas de 10 cc cada una y con recuperación promedio del 40% del total, al cabo de lo cual y una vez refrigerada, fue enviada a proceso al laboratorio. La muestra de 10 cc de sangre fue obtenida por venopunción de una de las venas del brazo, por profesional universitaria, y remitida con anticoagulante EDTA al laboratorio, donde se efectuó un recuento leucocitario total y diferencial automatizado (Cell Dyn 3500 Abott) para obtener el número absoluto de linfocitos totales circulantes (12,13). Procesamiento de las muestras en el laboratorio: Previa dilución de las muestras en buffer fosfato a pH 7,2 (PBS pH 7,2) en razón de 1:1, se procedió a separar las células mononucleares linfoides por centrifugación a 400 g. durante 30 minutos en gradiente de Ficoll-Histopaque 1077 (Sygma). El concentrado celular obtenido fue procesado para incubarlo a 4 grados Cº con anticuerpos monoclonales anti CD4 y anti CD8, separadamente, durante 30 minutos, para luego de lavado y nuevamente centrifugado, volver a incubar cada muestra de los sedimentos celulares mononucleares a 4 grados Cº con un conjugado de Fluoresceína-anticuerpos (Dakopatts) por 30 minutos. Luego de lavadas de nuevo las muestras con PBS 7,2 y centrifugadas, se procedió a su lectura y recuento por microscopía de fluorescencia (Nikon) sobre la base de 200 a 300 células mononucleares. Las muestras de lavado broncoalveolar, recolectadas también en tubos con EDTA, se procesaron de la misma forma que las muestras de sangre. RESULTADOS En todos los pacientes se produjo, a nivel pulmonar, normalización, ya a los 3 meses, de la relación linfocitos TCD4/TCD8 (Figura 1), por recuperación de la subpoblacional local de linfocitos TCD4 (Figura 2), manteniéndose los linfocitos TCD4 en sangre, sin variaciones (Figura 3). La subpoblación de linfocitos TCD 8 pulmonar se mantuvo sin cambios en un caso, aumentó en otro y disminuyó en el último. (Figura 4). COMENTARIOS El presente trabajo ratifica lo ya demostrado (7), en el sentido que la Tuberculosis pulmonar y, muy probablemente en las otras formas de la enfermedad, hay una seria alteración de la inmunidad celular local que es posible revertir, en forma relativamente precoz, con el tratamiento antituberculoso actualmente en uso. Vale la pena resaltar el hecho que una de las pacientes que recuperó la subpoblación de linfocitos TCD4 y la relación TCD4/TCD8 sólo al final del tratamiento, recayó de su enfermedad antes del año después del alta, lo que podría significar, si el hecho no fuera simplemente anecdótico, que esta enferma posee un trastorno de base de su inmunidad. Por otra parte, y si esta observación pudiese ser ratificada, se podría considerar que un pobre nivel de recuperación de las subpoblaciones celulares a nivel local, podría considerarse un marcador de probabilidad de recaída de los pacientes al final de su tratamiento. BIBLIOGRAFIA
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